1、实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30min，同时将浓缩洗涤液作1∶20稀释。 2、加待测标本每孔0.05ml，并设抗-HBc阳性对照、抗-HBc阴性对照各2孔，空白对照1孔。 （1）1∶30稀释血清(血浆)检测结果代表临床意义。 （2）原倍血清(血浆)检测结果代表流行病学意义。 3、加酶结合物每孔0.05ml，空白对照不加，充分混匀，置37℃孵育30min。 4、洗板机洗板选择洗涤程序5次洗板，最后拍干。 5、加显色剂先加显色剂A，每孔0.05ml;再加显色剂B，每孔0.05ml;充分混匀，放置37℃避光孵育15min。 6、终止反应每孔加终止液0.05ml，混匀。 7、测定用酶标仪读数，可选择单波长450nm(以空白孔校零)或双波长450/630，读取各孔OD值。